Thermo Scientific/20148/化學(xué)發(fā)光試劑盒現(xiàn)貨

ThermoFisher

20148

LightShift™ Chemiluminescent EMSA Kit

Thermo Scientific/20148/化學(xué)發(fā)光試劑盒現(xiàn)貨

Thermo Scientific/20148/化學(xué)發(fā)光試劑盒現(xiàn)貨

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描述

Thermo Scientific LightShift化學(xué)發(fā)光EMSA試劑盒是一種非常強(qiáng)勁且靈敏的檢測系統(tǒng)，通過進(jìn)行電泳遷移率實(shí)驗(yàn)(EMSA)檢測蛋白質(zhì)-DNA結(jié)合相互作用。這個(gè)試劑盒包括用于建立和定制DNA結(jié)合反應(yīng)的試劑，用于驗(yàn)證體系的一組對(duì)照DNA和蛋白提取物，作為探針去識(shí)別生物素標(biāo)記靶DNA的穩(wěn)定鏈霉親和素-HRP偶聯(lián)物，以及非常靈敏的用于檢測的化學(xué)發(fā)光底物。

LightShift 化學(xué)發(fā)光EMSA試劑盒的特點(diǎn)：

• 檢測胞核抽提物中低豐度蛋白的理想選擇
• 靈敏度超越放射性和地高辛檢測法
• 兼容之前建立的常規(guī)DNA-蛋白互作結(jié)合條件
• 包括EBNA對(duì)照系統(tǒng)，幫助新用戶建立一個(gè)適當(dāng)?shù)臋z測體系，了解用于確定相互作用特異性的方法

LightShift EMSA檢測的原理與蛋白免疫印跡類似。生物素末端標(biāo)記的雙鏈DNA與細(xì)胞核提取物或純化的因子共同孵育，之后進(jìn)行非變性凝膠電泳。然后將DNA快速（30分鐘）轉(zhuǎn)印至帶正電的尼龍膜上，進(jìn)行紫外交聯(lián)，然后使用HRP標(biāo)記的鏈霉親和素-HRP偶聯(lián)物檢測，再與底物孵育。從標(biāo)記到獲得結(jié)果的整個(gè)實(shí)驗(yàn)流程可以在一天內(nèi)完成。

蛋白與DNA之間的相互作用對(duì)于DNA復(fù)制、重組和修復(fù)、轉(zhuǎn)錄和病毒組裝等許多細(xì)胞進(jìn)程具有關(guān)鍵調(diào)控作用。電泳遷移率實(shí)驗(yàn)(EMSA)是研究基因調(diào)控和確定蛋白:DNA之間相互作用的核心技術(shù)之一。

EMSA技術(shù)基于一個(gè)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：即在非變性聚丙烯酰胺凝膠或瓊脂糖凝膠電泳過程中，蛋白:DNA復(fù)合物的遷移速度比自由的DNA分子更慢。由于蛋白結(jié)合使DNA的遷移速率發(fā)生了偏移或延遲，這個(gè)方法也被稱為凝膠遷移或凝膠阻滯分析。在EMSA技術(shù)出現(xiàn)之前，蛋白:DNA之間相互作用主要是通過硝化纖維素膜過濾實(shí)驗(yàn)分析。

整個(gè)實(shí)驗(yàn)中需要實(shí)驗(yàn)者準(zhǔn)備的是已純化的末端生物素標(biāo)記的目標(biāo)DNA，待檢測的蛋白提取物，尼龍膜和基本電泳設(shè)備。目標(biāo)DNA可在合成的同時(shí)進(jìn)行5'或3'端生物素標(biāo)記，或在合成之后使用Thermo Scientific生物素3'末端DNA標(biāo)記試劑盒（產(chǎn)品貨號(hào)89818）進(jìn)行標(biāo)記。用戶可通過不同方法獲得胞核、胞質(zhì)或全細(xì)胞蛋白提取物，包括Thermo Scientific NE-PER 核蛋白和胞質(zhì)蛋白提取試劑盒（產(chǎn)品貨號(hào)78833）。

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